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检验常识
酶免试剂盒操作中可能出现的问题及处理对策
  由于ELIAS试剂是一种利用生物化学反应的、高度敏感的临床诊断试剂,对其质量特性指标产生影响的因素众多。故在试剂的临床应用中常会产生某些非期望的结果,对这类问题的处理原则是客观、灵活。ELISA试剂盒操作中可能出现的问题及其处理对策:
 

问题

原因

防止方法

问题

原因

防止方法








1、试剂盒在运输途中时间太长,温度太高

试剂盒务必置于保温箱内运输,并放足够数量的冰块,尽量缩短运输时间。




15、其它杂物掉入孔内

用记号笔圈上便于分析。

2、试剂盒超过有效期

不要用超过有效期的试剂盒

16、不慎多加酶或滴于孔壁上,有残留

用吸水纸吸干壁上残留的酶或底物液。

3、试剂、样品使用前未能平衡

使用前试剂样品置室温平衡30分钟左右。

17、不慎多加或少加酶或显色剂

多加时显色深,少加则浅,用记号笔圈上,便于分析。

4、试用开启时间过长、长菌

试剂开启后请于半个月内用完

18、阈值附近时阴时阳

重复做奇数次,以偶数次结果为准。

5、移液器吸量不足,移液抽吸排放太快,吸头内壁挂液太多或内壁不清洁。

校正移液器,吸头要配套,每次装吸头要吻合紧密,移液不宜过快,排放应完全。吸头内壁要清洁,最好一次性用完。

19、标本离心处理不全,致使检测时反应孔内发生凝血现象或残留细胞成分干拢

血清或血浆应充分离心处理,3000rpm6分钟以上,

6、恒温箱温度不足37oC(或水浴锅温度不足37oC)

孵育反应期间控制好温度。













1、蒸馏水有问题

与好的蒸馏水同时比较

7、孵育反应时间不足

准确记时

2、洗涤液配制有误

按说明书配制。

8、洗涤时冲击力太大,洗涤液浸泡时间太长。洗涤次数增加

减少洗涤冲击力。按说明书要求的浸泡时间,准确记住洗涤次数

3、终止液误作洗涤稀释

每次配制时均应看清标签

9、显色剂滴加量不足或顺序颠倒,或混后加入

滴加显色液时,滴瓶垂直向下,用力均匀,滴速不宜过快,先加显色剂A,后加显色剂B,不可将AB液混合加入

4、终止液当显色剂使用

注意滴瓶标签

10、显色剂反应时间不足

准确记时

5、添加酶

注意不要漏加

11、蒸馏水水质有问题

检查蒸馏水水质。

6、添加显色剂AB

加显色剂后观察一下液面高度。

12、样品用NAN3防腐,抑制了酶的反应

样品不能加NaN3防腐。

1、水质问题

避免蒸馏水污染




1、样品加入量多少不一,加样时间有长有短

重复某一样品尽可能与第一次接近

2、酶加量过多

加酶前验看移液器调节是否正确。

2、样品加入后未混匀

加样后充分混匀

3、恒温箱温度超37oC。酶结合物反时间或底物显色时间超过时间较多

放入板之前要验看恒温箱温度,准确定时

3、移液器加样量不一致

尽可能使用同一移液器和装紧吸头。移液时用力及抽吸速度一致

4、洗涤不充分、反应孔中其它成分残留,或酶残留

充分洗涤

4、测量波度不对

按说明书严格操作

5、显色剂受光照时间较长或污染

显色剂AB应于使用前10分钟从冰箱取出。

5、酶标仪重复性差

校准酶标仪

6、整批样品放置时间过长、样品污染

样品应保持新鲜,或低温保存,防止污染。

6、操作过程个别孔液体外溅

稳拿稳放,防止外溅

7、吸头重复使用,未洗净或消毒不完全而用于加酶或显色剂

吸头尽可能一次性能使用

7、不同批号试剂盒中组份混淆

不同批号试剂组份不能混用。

1、操作不慎

按说明书洗板,加样

8、瓶盖相互交叉使用

不同组份的瓶盖不能交叉使用

2、洗板机孔堵,残留液较多。加洗液及抽吸液不均匀

显色,洗板步骤尤为重要检查洗板机,并进行调整。

9、保温时间不一致

重复测定标本,各项条件应尽可能保持致,以消除可能产生的误差。

3、样品离心处理不全,反应孔内发生凝血或残留细胞成分

充分离心,3000rpm6分钟以上

10、洗涤条件不一致辞

重复测定标本,各项条件应尽可能保持致,发消除可能产生 的误差。

11、显色条件时间不一致

重复测定标本,各项条件应尽可能保持致,以消除可能产生的

 

1、  若不同批号试剂的不同组分(B液。酶结合物)、或不同试剂的不同组分进行交叉使用,有可能出现显色浅或本底高、花板等情况。

2、  若逐一排除可能因素仍出现上述情况,可与另一批号试剂盒进行对照以排除试剂盒质量问题。

12、操作人员不一致

重复测定标本,各项条件应尽可能保持致、以消除可能产生的误差。

13、洗涤不正确

尽量使用洗板机洗涤。手洗时应尽量避免交叉污染。

14、温育条件不一致(如:一次用水浴,一次用恒温箱)

恒温箱温育较水浴显色深,最好采用恒温箱,没有恒温箱者,水浴锅的水温应控制在37oC


 

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